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人重组激活基因1(RAG-1)检测试剂盒Human recombination activating gene 1,RAG-1 ELISA试剂盒#2022已更新

北京沃莱士生物科技有限公司 发布时间:2022/10/25 15:07:31

据新闻部10月25日15点12分透露:人重组激活基因1(RAG-1)检测试剂盒Human recombination activating gene 1,RAG-1 ELISA试剂盒#2022已更新
http://www.app17.com/c164984/products/d11529890.html 

 

本试剂仅供研究使用

试剂盒组成:

试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存

说明书 1 份 1 份

封板膜 2 片(48) 2 片(96)

密封袋 1 个 1 个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品:90ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存

酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存

样本处理及要求:

1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上

清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心

20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次

离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程

中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/

分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞

浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分

钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待

检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在、第二孔中分别加标

准品 100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从孔、第二

孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,

混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各

取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl,

浓度分别为 60ng/L,40ng/L ,20ng/L,10ng/L, 5ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样

品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混

匀。

3. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

4. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

5. 配液:将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后备用。

6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

7. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

8. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值

大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物请避光保存。

7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

29. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,

在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释

倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值

代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释

倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。

2.批内与批间应分别小于 9%和 15%

检测范围:

2ng/L -80ng/L

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6 个月


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